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技術(shù)文章
什么是Streptavidin 鏈霉親和素及偶聯(lián)物
   Streptavidin 鏈霉親和素及偶聯(lián)物是一種來源于阿維丁鏈霉菌(streptomyces avidinii)的生物素結(jié)合蛋白質(zhì),其非特異性結(jié)合遠(yuǎn)比親和素低,且與蛋清親和素在中性pH值具有凈正電荷和包含大約7%的碳水化合物相比,鏈霉親和素蛋白具有在中性pH值幾乎沒有凈電荷,不含有碳水化合物等更有利的化學(xué)性質(zhì),所以它被廣泛用來作為抗生物素蛋白的替代品。

  Streptavidin 鏈霉親和素及偶聯(lián)物是四聚體蛋白,大小為66KDa。一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合,兩者之間的親和力極為強(qiáng)烈,Streptavidin 鏈霉親和素及偶聯(lián)物-生物素復(fù)合物的解離常數(shù)處于 10 mol/L 數(shù)量級,這一性質(zhì)常用于分子生物學(xué)用途 。其中一條完整的SA肽鏈中有159個氨基酸殘基,分子量為16450。

  消光系數(shù)與蛋白中Tyr含量有關(guān), 由于SA 中Tyr的含量比AV 多,所以SA的比消光系數(shù)也較AV 為高,兩者分別為E 1mg/mL=3.40和E1mg/mL=1.57。在282nm 上這兩種蛋白結(jié)合生物素后并不改變其消光系數(shù),而在233nm上,它們結(jié)合生物素后郡便其消光系數(shù)值增高,現(xiàn)在一般都是利用蛋白的這種吸光特點(diǎn)來測定它們的活性。

  Streptavidin 鏈霉親和素及偶聯(lián)物分子由4條相同的肽鏈組成,其氨基酸組成中,甘氨酸和丙氨酸的含量較大,而且結(jié)合生物素的活性基團(tuán)也是肽鏈中的色氨酸殘基;鏈霉親和素是一種稍偏酸性(pH6.0)的蛋白質(zhì),并且不帶任何糖基。在蛋白水解酶作用下,鏈霉親和素可在N端10~12和C端19-21間斷裂,形成的核心鏈霉親和素仍然保持完整的結(jié)合生物素的能力。Streptavidin 鏈霉親和素及偶聯(lián)物的活性單位也是以結(jié)合1μg生物素所需的量來表示,1mg鏈霉親和素的zui高活性可達(dá)18U。

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