二氨基聯(lián)苯胺(Diaminobenzidine，DAB)是辣根過(guò)氧化物酶最敏感、常用的顯色底物，反應(yīng)產(chǎn)物因不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物而被廣泛地用于蛋白印跡(Western Blot，WB)、免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry，IHC)和免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry，ICC)、斑點(diǎn)印跡(Dot blot)和生物芯片(Biochip)等的染色和顯色反應(yīng)。
使用說(shuō)明
使用前先用蒸餾水將B顯色液(1:25)稀釋為工作液，然后按比例(1:25)加入A顯色液，混勻后立即使用。顯色時(shí)間1-30分鐘，顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可引起本底增高，故應(yīng)密切觀察顯色過(guò)程(一般3-10分鐘理想)，并在本底較淺且達(dá)到適當(dāng)顯色強(qiáng)度時(shí)以流水漂洗終止顯色反應(yīng)。
稀釋方法:取去離子水920ul，加入B顯色液40ul混勻，再加入40ul的A顯色液，混勻后即可使用。工作液建議用量:免疫組化50-100ul/切片，WB每張膜200-5000ul/膜
注意事項(xiàng)
1. DAB溶液應(yīng)低溫密封保存。如有結(jié)晶析出，應(yīng)確保結(jié)晶*溶解再行使用;
2. 顯色工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，新鮮配制的工作液應(yīng)為無(wú)色或淺棕色，如顏色過(guò)深，請(qǐng)勿使用;
3. DAB在常溫下不穩(wěn)定，每次取用后均應(yīng)及時(shí)加蓋密封放回冰箱，以免因DAB分解影響實(shí)驗(yàn)，或因滲漏造成實(shí)驗(yàn)環(huán)境污染;
4. DAB有潛在致突變作用，操作時(shí)應(yīng)注意穿戴好防護(hù)用具。
二氨基聯(lián)苯胺操作步驟儲(chǔ)存條件：
避光、干燥陰涼處封閉貯存，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混放、混運(yùn)。本品為非危險(xiǎn) 產(chǎn)品可按一般化學(xué)品運(yùn)輸，輕搬動(dòng)輕放，防止日曬、雨淋!受熱、受潮、受光后易喪失活力，保存期短，因此貯存和運(yùn)輸條件比較苛刻。
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