NMY51酵母感受態(tài)細胞
簡要描述：
NMY51酵母感受態(tài)細胞：雙膜系統(tǒng)利用NMY51酵母菌，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進行蛋白突變驗證或篩庫實驗。轉(zhuǎn)化標(biāo)志為TRP1，leu2-3。報告基因為HIS3，ADE2和LacZ。NMY51的選擇性生長篩選通過營養(yǎng)缺陷報告基因（HIS3，ADE2）進行，之后通過LacZ報告基因進行β-半乳糖分析的定量或半定量篩選，三個獨立的報告基因由不同的啟動子調(diào)控，有助于降低假陽性幾率。
產(chǎn)品時間：2024-03-20
打印當(dāng)前頁NMY51 Chemically Competent Cell
酵母菌化學(xué)感受態(tài)細胞
溫馨提示
見我司（懋康生物）整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產(chǎn)品專題。
產(chǎn)品關(guān)鍵詞：
Dualmembrane system 雙膜系統(tǒng)；Dualsystems Biotech；Y1HGold；pBT3-STE；pPR3-STE；NMY51；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金擔(dān)子素；
產(chǎn)品訂購：
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2360-1000UL | NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 290 |
MF2360-5000UL | NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1320 |
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 保存 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2360-1000UL | MF2360-5000UL | |||
MF2360-A | NMY51 Chemically Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2360-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2360-C | Carrier DNA (10μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2360-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
產(chǎn)品描述
雙膜系統(tǒng)（Dualmembrane system）是由Dualsystems Biotech公司開發(fā)的專門篩選跨膜蛋白間相互作用的篩選技術(shù)，該技術(shù)利用分離的泛素系統(tǒng)直接檢測天然狀態(tài)下膜蛋白間的相互作用，是目前為止為一用來檢測膜蛋白間相互作用的酵母雙雜交系統(tǒng)。
雙膜系統(tǒng)利用NMY51酵母菌，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進行蛋白突變驗證或篩庫實驗。轉(zhuǎn)化標(biāo)志為TRP1，leu2-3。報告基因為HIS3，ADE2和LacZ。NMY51的選擇性生長篩選通過營養(yǎng)缺陷報告基因（HIS3，ADE2）進行，之后通過LacZ報告基因進行β-半乳糖分析的定量或半定量篩選，三個獨立的報告基因由不同的啟動子調(diào)控，有助于降低假陽性幾率。
雙膜系統(tǒng)的工作原理在于：泛素分子量很小，由76個氨基酸殘基組成。泛素作為降解信號分子，能夠連接另一個蛋白的N端，之后被泛素專一性蛋白酶（ubps）識別，導(dǎo)致與泛素相連蛋白被酶降解。泛素可人為分成兩個部分：N端（Nub）和C端（Cub）。首先，將泛素Nub的三位異亮氨酸突變成甘氨酸（Nubi突變?yōu)?/span>NuBG），通過這種方式Cub的親和力明顯降低，避免Cub和Nub自我結(jié)合或靠近的可能性。其次，Cub與合成的LEXA-VP16轉(zhuǎn)錄激活因子融合成融合蛋白Cub-lexa-vp16。正常情況下，NuBG不與Cub結(jié)合，ubps也不能識別分離的泛素，轉(zhuǎn)錄激活因子也不會被切下來。后，將待測蛋白分別與NuBG和Cub融合，形成bait融合蛋白（bait-cub-lexa-vp16）和prey融合蛋白（prey-NuBG）。如果bait和prey發(fā)生相互作用，促使NuBG和Cub的相互接近，從而被ubps識別，導(dǎo)致LEXA-VP16的解離，進入核內(nèi)，進而激活報告基因的轉(zhuǎn)錄。該系統(tǒng)能使用四種Bait質(zhì)粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，篩選標(biāo)志是Leu。三種prey質(zhì)粒：pPR3-C ，pPR3-SUC，pPR3-STE，篩選標(biāo)志是Trp。
本品為經(jīng)特殊工藝制備的NMY51酵母菌化學(xué)感受態(tài)細胞，用pGADT7質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個月。
基因型
MATa, his3Δ200, trp1-901, leu2-3, 112, ade2, LYS2::(lexAop)4-HIS3, ura3::(lexAop)8-lacZ, ade2::(lexAop) 8-ADE2, GAL4
使用方法
1. Carrier DNA于使用前通過加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài)，方法如下：95-100℃ 水浴或金屬浴3min，快速插入冰中，靜置3min。重復(fù)一次。
2. 取100 µl冰上融化的NMY51化學(xué)感受態(tài)細胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5 µg，單鏈Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
3. 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
4. 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH2O重懸沉淀，離心30s棄上清。
5. 用50 µl ddH2O重懸，涂板，放入29℃培養(yǎng)48-96 h。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
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NMY51酵母感受態(tài)細胞
NMY51酵母感受態(tài)細胞