7-AAD 細胞周期檢測試劑盒細胞增殖
簡要描述:
7-AAD 細胞周期檢測試劑盒細胞增殖 7-AAD細胞周期檢測試劑盒(7-AAD Cell Cycle Analysis Kit)是一款采用7-AAD染色法進行細胞周期檢測的試劑盒,通過流式細胞儀進行分析。本試劑盒通常用于貼壁細胞或懸浮細胞的細胞周期檢測。對于組織樣品,需經(jīng)消化成單細胞后才可用此試劑盒進行檢測。
產(chǎn)品時間:2024-05-23
7-AAD Cell Cycle Analysis Kit細胞周期檢測試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格(元) |
7-AAD Cell Cycle Analysis Kit 細胞周期檢測試劑盒 | MX3236-50T | 50T | 700 |
MX3236-100T | 100T | 1120 | |
MX3236-200T | 200T | 1720 |
產(chǎn)品描述
7-AAD 細胞周期檢測試劑盒(7-AAD Cell Cycle Analysis Kit)是一款采用7-AAD染色法進行細胞周期檢測的試劑盒,通過流式細胞儀進行分析。本試劑盒通常用于貼壁細胞或懸浮細胞的細胞周期檢測。對于組織樣品,需經(jīng)消化成單細胞后才可用此試劑盒進行檢測。
7-氨基放線jun素D(7-Aminoactinomycin D,7-AAD)是一種不具有膜滲透性的DNA結(jié)合染料(選擇性插入DNA的GC富集區(qū)),通常被活細胞排除在外。活細胞和早期凋亡細胞排斥7-AAD不被染色,但具損傷質(zhì)膜或受損/無代謝活動的細胞無法阻擋染料進入而被染色。7-AAD/DNA復合物能被488nm的氬離子激發(fā)器,發(fā)生大的斯托克斯遷移,發(fā)射波長在647nm。細胞經(jīng)7-AAD染色后,假設(shè)G0/G1期細胞的熒光強度為1,那么,含雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度理論值為2,正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度介于1-2(見附圖I)。
產(chǎn)品組成
組分編號 | 組分名稱 | 保存方法 | 產(chǎn)品編號(規(guī)格) | ||
MX3236-50T | MX3236-100T | MX3236-200T | |||
MX3236-A | 染色緩沖液 | +4℃ | 5ml | 10ml | 20ml |
MX3236-B | 7-AAD染色液(25×) | +4℃避光 | 0.2ml | 0.4ml | 0.8ml |
MX3236-C | RNase A(50×) | -20℃ | 0.1ml | 0.2ml | 0.4ml |
保存與運輸方法
保存:染色緩沖液+4℃保存,7-AAD染色液+4℃避光保存,RNase A-20℃保存,一年有效。
運輸:冰袋運輸。
注意事項
1) 因7-AAD也能結(jié)合RNA,因此,試劑盒內(nèi)提供RNase A用來降解RNA,以降低背景熒光。然而,雖有資料顯示,7-AAD不和RNA結(jié)合,但從我司的實驗數(shù)據(jù)來看,添加RNase處理的效果更好。
2) 因7-AAD不具有細胞膜滲透性,則需先對細胞進行乙醇固定,再進行后續(xù)染色。
3) 請自行準備95%乙醇和PBS。
4) 熒光染料均存在熒光淬滅,保存和使用過程中請注意避光,以減緩淬滅。
5) 因7-AAD對人體有刺激性,請注意適當防護。
6) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、 染色步驟
1.1 細胞樣品的準備:每個樣品的細胞數(shù)量可以為500萬以上。
a)對于貼壁細胞:小心收集細胞培養(yǎng)液到一干凈離心管內(nèi)備用。用胰mei消化細胞,直至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000rpm離心3-5min,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果無法完quan離心至管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心速度。小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1ml 冰浴預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。再次加入1ml冰浴預冷的PBS,重懸細胞。
b)對于懸浮細胞:1000rpm離心5min沉淀細胞。對于特定的細胞,如果無法完quan離心至管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心速度。小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入1ml 冰浴預冷的PBS,重懸細胞,并轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的PBS,以避免吸走細胞。再次加入1ml冰浴預冷的PBS,重懸細胞。
c)對于組織樣本:用剪刀將組織剪成盡量小的小塊后,用0.25%胰mei消化30-60min(或根據(jù)實際情況選擇適當?shù)幕旌厦竵磉M行組織消化),經(jīng)過200-400目細胞篩網(wǎng)過濾得到單細胞懸液。然后參照步驟b)對于懸浮細胞來準備樣品。
1.2 細胞固定:取4ml冰浴預冷的95%乙醇,一邊低速渦旋震蕩的同時逐滴加入1ml細胞懸液(冰上操作),混勻后于4℃固定2h或更長時間,固定12~24h可能效果更佳。1500rpm離心5min沉淀細胞。對于特定的細胞,如果無法完quan離心至管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心速度。小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的乙醇固定液,以避免吸走細胞。加入約5ml冰浴預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的PBS,以避免吸走細胞。輕輕彈動離心管底以分散細胞避免細胞成團。
1.3 7-AAD染色工作液的配制:參照下表根據(jù)實際檢測樣本的數(shù)量配制足量的7-AAD染色工作液【注意:7-AAD染色工作液短時間可4℃保存,但需當日使用】。
1個樣品 | 5個樣品 | 10個樣品 | |
染色緩沖液 | 0.1ml | 0.5ml | 1.0ml |
7-AAD染色液(25×) | 4μl | 20μl | 40μl |
RNase A(50×) | 2μl | 10μl | 20μl |
1.4 染色:每管細胞樣品中加入0.1ml 7-AAD染色工作液,緩慢并充分重懸細胞沉淀,37℃避光孵育30min。隨后可置于4℃或冰浴避光存放。
1.5 加入2ml PBS,1500rpm離心5min,去上清。
1.6 加入500μl PBS,流式細胞儀上機檢測?!菊堅?4h內(nèi)完成流式檢測,能在當天完成流式檢測?!?/p>
1.7 流式檢測與分析:用流式細胞儀在激發(fā)波長488nm處檢測紅色熒光(7-AAD通道或PerCP通道),同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行DNA含量和光散射分析。
【注意】:j上機時,熒光通道設(shè)置為線性放大(Linear Scale);k數(shù)據(jù)分析,去除粘連細胞。
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附圖I.典型的7-AAD細胞周期示例圖(參考用)
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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