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產(chǎn)品中心
7-AAD 細胞周期檢測試劑盒細胞增殖

7-AAD 細胞周期檢測試劑盒細胞增殖

簡要描述:

7-AAD 細胞周期檢測試劑盒細胞增殖 7-AAD細胞周期檢測試劑盒(7-AAD Cell Cycle Analysis Kit)是一款采用7-AAD染色法進行細胞周期檢測的試劑盒,通過流式細胞儀進行分析。本試劑盒通常用于貼壁細胞或懸浮細胞的細胞周期檢測。對于組織樣品,需經(jīng)消化成單細胞后才可用此試劑盒進行檢測。

產(chǎn)品時間:2024-05-23

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7-AAD Cell Cycle Analysis Kit細胞周期檢測試劑盒



產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

7-AAD Cell Cycle Analysis Kit

細胞周期檢測試劑盒

MX3236-50T

50T

700

MX3236-100T

100T

1120

MX3236-200T

200T

1720


產(chǎn)品描述

7-AAD 細胞周期檢測試劑盒(7-AAD Cell Cycle Analysis Kit)是一款采用7-AAD染色法進行細胞周期檢測的試劑盒,通過流式細胞儀進行分析。本試劑盒通常用于貼壁細胞或懸浮細胞的細胞周期檢測。對于組織樣品,需經(jīng)消化成單細胞后才可用此試劑盒進行檢測。

7-氨基放線jun素D(7-Aminoactinomycin D,7-AAD)是一種不具有膜滲透性的DNA結(jié)合染料(選擇性插入DNA的GC富集區(qū)),通常被活細胞排除在外。活細胞和早期凋亡細胞排斥7-AAD不被染色,但具損傷質(zhì)膜或受損/無代謝活動的細胞無法阻擋染料進入而被染色。7-AAD/DNA復合物能被488nm的氬離子激發(fā)器,發(fā)生大的斯托克斯遷移,發(fā)射波長在647nm。細胞經(jīng)7-AAD染色后,假設(shè)G0/G1期細胞的熒光強度為1,那么,含雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度理論值為2,正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度介于1-2(見附圖I)。


產(chǎn)品組成

組分編號

組分名稱

保存方法

產(chǎn)品編號(規(guī)格)

MX3236-50T

MX3236-100T

MX3236-200T

MX3236-A

染色緩沖液

+4℃

5ml

10ml

20ml

MX3236-B

7-AAD染色液(25×)

+4℃避光

0.2ml

0.4ml

0.8ml

MX3236-C

RNase A(50×)

-20℃

0.1ml

0.2ml

0.4ml

保存與運輸方法

保存:染色緩沖液+4℃保存,7-AAD染色液+4℃避光保存,RNase A-20℃保存,一年有效。

運輸:冰袋運輸。


注意事項

1) 因7-AAD也能結(jié)合RNA,因此,試劑盒內(nèi)提供RNase A用來降解RNA,以降低背景熒光。然而,雖有資料顯示,7-AAD不和RNA結(jié)合,但從我司的實驗數(shù)據(jù)來看,添加RNase處理的效果更好。

2) 因7-AAD不具有細胞膜滲透性,則需先對細胞進行乙醇固定,再進行后續(xù)染色。

3) 請自行準備95%乙醇和PBS。

4) 熒光染料均存在熒光淬滅,保存和使用過程中請注意避光,以減緩淬滅。

5) 因7-AAD對人體有刺激性,請注意適當防護。

6) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用方法

一、 染色步驟

1.1 細胞樣品的準備:每個樣品的細胞數(shù)量可以為500萬以上。

a)對于貼壁細胞:小心收集細胞培養(yǎng)液到一干凈離心管內(nèi)備用。用胰mei消化細胞,直至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000rpm離心3-5min,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果無法完quan離心至管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心速度。小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1ml 冰浴預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。再次加入1ml冰浴預冷的PBS,重懸細胞。

b)對于懸浮細胞:1000rpm離心5min沉淀細胞。對于特定的細胞,如果無法完quan離心至管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心速度。小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入1ml 冰浴預冷的PBS,重懸細胞,并轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的PBS,以避免吸走細胞。再次加入1ml冰浴預冷的PBS,重懸細胞。

c)對于組織樣本:用剪刀將組織剪成盡量小的小塊后,用0.25%胰mei消化30-60min(或根據(jù)實際情況選擇適當?shù)幕旌厦竵磉M行組織消化),經(jīng)過200-400目細胞篩網(wǎng)過濾得到單細胞懸液。然后參照步驟b)對于懸浮細胞來準備樣品。


1.2 細胞固定:取4ml冰浴預冷的95%乙醇,一邊低速渦旋震蕩的同時逐滴加入1ml細胞懸液(冰上操作),混勻后于4℃固定2h或更長時間,固定12~24h可能效果更佳。1500rpm離心5min沉淀細胞。對于特定的細胞,如果無法完quan離心至管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心速度。小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的乙醇固定液,以避免吸走細胞。加入約5ml冰浴預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的PBS,以避免吸走細胞。輕輕彈動離心管底以分散細胞避免細胞成團。


1.3 7-AAD染色工作液的配制:參照下表根據(jù)實際檢測樣本的數(shù)量配制足量的7-AAD染色工作液【注意:7-AAD染色工作液短時間可4℃保存,但需當日使用】


1個樣品

5個樣品

10個樣品

染色緩沖液

0.1ml

0.5ml

1.0ml

7-AAD染色液(25×)

4μl

20μl

40μl

RNase A(50×)

2μl

10μl

20μl


1.4 染色:每管細胞樣品中加入0.1ml 7-AAD染色工作液,緩慢并充分重懸細胞沉淀,37℃避光孵育30min。隨后可置于4℃或冰浴避光存放。


1.5 加入2ml PBS,1500rpm離心5min,去上清。


1.6 加入500μl PBS,流式細胞儀上機檢測?!菊堅?4h內(nèi)完成流式檢測,能在當天完成流式檢測?!?/p>


1.7 流式檢測與分析:用流式細胞儀在激發(fā)波長488nm處檢測紅色熒光(7-AAD通道或PerCP通道),同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行DNA含量和光散射分析。

【注意】:j上機時,熒光通道設(shè)置為線性放大(Linear Scale);k數(shù)據(jù)分析,去除粘連細胞。


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貨號

名稱

規(guī)格

MX3210-20T

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20T

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20T

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30T

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100T

MX3236-50T

7-AAD Cell Cycle Analysis Kit細胞周期檢測試劑盒

50T

MX2001-100ML

AccutaseTM Cell Detachment Solution細胞消化液(干細胞級別)

100ml

MX2007-100ML

AccumaxTM Cell Dissociation Solution細胞解離液

100ml


附圖I.典型的7-AAD細胞周期示例圖(參考用)

 

 

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

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