EPI300 Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

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產(chǎn)品組分：

菌株描述

EPI300菌株有一個突變的trfA基因，該基因表達出的蛋白產(chǎn)物可以促進含有ori V復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴繁，誘導(dǎo)液（CopyCutter Induction Solution）可以誘導(dǎo)trfA基因的表達。當(dāng)含有ori V復(fù)制子質(zhì)粒的EPI300細(xì)胞在LB/2YT或SOB培養(yǎng)基中生長時，trfA基因的表達被抑制，ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平；當(dāng)在培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)液（CopyCutter Induction Solution），ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。

【更多特征】：

[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型，使EPI300適合于甲基化DNA的有效克隆；

endA1的突變確保質(zhì)粒克隆的高產(chǎn)量；recA1的突變確保大分子DNA插入的穩(wěn)定性；

lacZΔM15標(biāo)記的存在，使EPI300適用于藍白斑篩選；

rpsL賦予EPI300鏈mei素抗性。

EPI300菌株基因型：F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌EPI300菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率＞3×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2） 在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。

3） 進行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進行。

4） 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

5） 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

6） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

7） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加700 μl無菌的2YT或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達，使菌體復(fù)蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)過夜。如果進行藍白斑篩選，37℃培養(yǎng)至少15h。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆較少，可通過離心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 

相關(guān)產(chǎn)品

附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方

附表2固體和液體2-YT培養(yǎng)基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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